<font id="4yxuh"></font>
<p id="4yxuh"></p>

      <li id="4yxuh"></li>
      1. <p id="4yxuh"></p>
        <p id="4yxuh"><font id="4yxuh"></font></p>
          1. 無菌操作臺標準操作規程

            無菌(fungus)操作臺標準操作規程

            1.目的:
            建立無菌檢查的標準操作規程,確保檢驗結果的準確性。   
            2.范圍:
            適用于本廠質監科化驗室對本廠生產的注射劑進行無菌檢查。超凈工作臺生物安全柜(Biosafety Cabinet)不同。超凈工作臺只能保護在工作臺內操作的試劑等不受污染,并不保護工作人員,而生物安全柜是負壓系統,能有效保護工作人員。

            3.責任:
            化驗員有責任按本操作規程操作,并對檢驗結果負責。

            4.定義:
            無菌檢查法系指檢查藥品是否無菌的一種方法。

            5.內容:
            5.1無菌操作設備:
            無菌操作室或超凈工作臺,無菌衣、口罩、帽子、消毒(disinfection)鞋、酒精燈(Alcohol lamp)等。
            5.1.1無菌室分無菌操作室和緩沖間。在緩沖間內應有洗手盆、干手器、無菌衣放置架及掛鉤、拖鞋等。無菌操作室應具有空氣除菌過濾的層流裝置,局部(part)潔凈度100級超凈工作(gōng zuò)臺。緩沖間及操作室內均設置能達到空氣消毒的紫外光燈和照明燈,操作室或工作臺應保持空氣正壓。
            5.1.2無菌室應每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液擦拭操作臺及可能污染的死角,開動無菌空氣過濾器及紫外光燈殺菌1小時。在每次操作完畢,同樣用2%甲酚或0.1%新潔爾滅溶液擦拭工作臺面,用紫外光燈殺菌半小時。
            5.1.3無菌室的無菌程度檢查:無菌室在消毒處理(chǔ lǐ)后,無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數。取直徑90mm雙碟,在接種室內點燃酒精燈,在酒精燈旁,以無菌操作,將雙碟半開注入溶化的營養瓊脂培養基約20ml,制成平板:在35-37℃預培養48小時,證明無菌后將3個平板以無菌方式帶入無菌操作間的潔凈區域左、中、右各放1個;打開碟蓋扣置,平板在空氣中暴露30分鐘后將蓋蓋好,置35-37℃培養48小時,取出檢查,3個平板上生長的菌落數相加總數不得超過10個。
            無菌操作臺面或超凈工作臺應定期請有關部門檢測其潔凈度,應達到100級(一般用塵埃粒子計數儀),檢測塵埃粒徑≤5μm的粒數不得超過3.5個/升;空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s;細菌菌落數平均<1個,可根據無菌狀況定期置換過濾器。
            5.1.4無菌室內應準備好盛有消毒用5%甲酚的玻璃缸、酒精燈、火柴、鑷子、75%酒精棉及拖鞋等。
            5.2儀器、用具:
            5.2.1真空泵、恒溫培養箱、生物顯微鏡、托盤天平(精度0.1g)、抽濾瓶(500ml)、   三角瓶(100、500 ml)、移液管(1、10ml)、注射器(要求規格)、試管、雙碟(9cm)、注射針、鑷子、剪刀、白金耳、橡皮管、紗布、棉花(原棉)、不銹鋼吸管筒、接種環、微孔濾膜(直徑約5cm),孔徑(aperture)應在0.45±0.02μm )載玻片、灑精燈、取樣勺、吸耳球、噴霧瓶。
            5.2.2用具的包扎:
            5.2.2.1移液管
            在移液管上端管內,松松地塞進少許原棉,然后放入不銹鋼滅菌筒內。超凈工作臺是為了適應現代化工業、光電產業、生物制藥以及科研試驗等*域對局部工作區域潔凈度的需求而設計的。
            5.2.2.2試管
            在管口塞上紗布棉塞。
            5.2.2.3無菌衣、褲、帽、口罩
            將洗凈的衣褲、帽子、口罩配套后裝入布袋,扎緊袋口,再用牛皮紙包好。
            5.2.2.4注射器
            洗滌干凈的注射器及注射針頭裝配好后,放入墊有紗布的帶蓋容器內(飯盒)一層層放好,上面蓋上紗布,然后蓋上容器的蓋子,用牛皮紙包好。
            5.2.2.5濾器
            將檢驗合格后微孔濾膜先有水中浸泡濕潤,取出后固定在細菌過濾器的濾板(Filter plate)上,濾板下、濾膜上均用耐高溫墊圈墊好,上好濾器。在滅菌前濾器的螺勿擰太緊,濾器上口用8層紗布及牛皮紙包扎,裝妥后放入容器內,再將盛濾器的容器蓋好蓋子,用牛皮紙包扎。
            5.2.3用具的滅菌:
            將包扎好的用具,在121±0.5℃蒸汽滅菌柜中滅菌30分鐘,物品取出時切勿立即置冷處,以免急速冷卻滅菌物品內蒸汽冷凝造成負壓,易致染菌,應置溫箱或或加溫烘干。
            5.3培養基、試劑:
            5.3.1一般采用商品干燥培養基,臨用時按照使用說明書進行配制,需注意培養基的pH值應符合規定,否則必須校正后,滅菌使用。
            使用前,按要求分裝滅菌好的細菌培養基須經30-35℃培養48小時,真菌培養基須經20-25℃培養72小時,證明無菌生長后方可使用。
            制備的需氣菌、厭氣菌培養基應半個月內用完,在供試品接種前,培養基指示劑氧化層的顏色不得超過培養基深度約1/5,否則須經水浴煮沸加熱,只限加熱一次。
            5.3.2革蘭氏碘液:
            先用3-5ml蒸餾水溶解2.0g碘化鉀,再加入1.0g碘片,攪拌溶解后,加蒸餾水稀釋**300ml,搖勻。置密閉棕色瓶中備用。
            5.3.3結晶紫染色液:
            將結紫1.0g溶解于20ml95%乙醇中后,與80ml1%草酸銨溶液相混合,靜置48小時使用。超凈工作臺與生物安全柜(Biosafety Cabinet)不同。超凈工作臺只能保護在工作臺內操作的試劑等不受污染,并不保護工作人員,而生物安全柜是負壓系統,能有效保護工作人員。此液穩定,置密閉的棕色瓶中可儲存數月。
            5.3.4沙黃染色液:
            將0.2g沙黃溶解于10ml95%乙醇中,待完全溶解后再加蒸餾水**100ml。
            5.3.5生理鹽水:
            稱取9g氯化鈉,加水1000ml溶解,分裝后于121±0.5℃濕熱滅菌30分鐘。供作稀釋劑用。
            5.3.6 75%乙醇
            量取無水乙醇75ml,加水稀釋**100ml,搖勻,即得。
            5.3.7 0.1%新潔爾滅:
            量取5%新潔爾滅20ml,加水稀釋**約1000ml,搖勻,即得。
            5.4培養基靈敏度檢查:
            5.4.1新購的干燥培養基或采用不同牌號原材料的新鮮培養基,其質量均應符合靈敏度檢查要求。
               
              (1)取藤黃微球菌(fungus)[Micrococcus luteus  CMCC(B)  28001]的營養瓊脂斜面和白色念珠菌[Candida  albicans  CMCC(F)98001]的真菌培養基瓊脂斜面的新鮮培養物,分別用0.9%無菌氯化鈉溶液制成均勻的菌懸液;取生孢梭菌[Clostridium  sporogenes  CMCC(B)64941]不含瓊脂的需氣、厭氣培養基新鮮培養物,用滅菌毛細管將其吸**滅菌離心管內,離心,棄去上清液,沉淀菌體用0.9%無菌氯化鈉溶液制成均勻菌懸液。然后以10倍系列稀釋后,制成1ml中含10-100個菌并計數。
                
              (2)取藤黃微球菌、生孢梭菌的需氣、厭氣培養基新鮮培養物,白色念珠菌的真菌培養基瓊脂斜面的新鮮培養物,取接種**霉菌培養基內,20-25℃用0.9%無菌氯化鈉溶液作10倍稀釋,制成1ml中含10-100個菌并計數。
               將藤黃微球菌(fungus)的上述
              (1)或
              (2)的稀釋液各1ml,分別接種**每管裝量為9ml的需氣、厭氣菌培養基3管,生孢梭菌的上述
              (1)或
              (2)的稀釋液各1ml,分別接種**每管裝量為12ml的需氣、厭氣菌培養基3管,白色念珠菌的上述
              (1)或
              (2)的稀釋液各1ml,接種**每管裝量為9ml的真菌培養基3管,以未接種的培養基作對照,按規定(guī dìng)的溫度培養5天并逐日記錄結果。
            結果判定:以每株菌接種后的培養基不得少于2管呈現生長(Grow),即該培養基的靈敏度檢查符合要求。
            5.4.2配制的培養基應在涼暗處保存,一般不得超過2周,臨用前細菌和霉菌(mold)培養基分別經30-35℃和20-25℃培養不少于48小時和72小時,證明無菌生長后方可使用。
            5.4.3需氣菌、厭氣菌培養基在試管中裝量高度不得少于7Cm,其指示劑氧化層不得超過培養基深度的1/5,否則須經水浴煮沸10分鐘,但只限加熱一次。
            無菌試驗培養時間結束時,指示劑氧化層應不超過培養基深度的1/2。
            5.5對照用菌液的制備:
            5.5.1試驗用菌種、菌種的復蘇、菌種的接種與保存等均應按照“抗生素微生物檢定法”標準操作規程項下操作。
            5.5.2金黃色葡萄球菌菌液用接種環取金黃色葡萄球菌[Staphy-lococcus aureus  CMCC(B)26003]的營養瓊脂斜面新鮮培養物少許,接種**營養肉湯培養基內,在30-35℃培養16-18小時后,用滅菌生理鹽水稀釋成
              1:106
            5.5.3生孢梭菌菌液用接種環取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氣菌、厭氣菌培養基新鮮培養物1白金耳,接種**相同培養基內,在30-35℃培養18-24小時后,用滅菌生理鹽水稀釋成
              1:106。
            5.5.4白色念珠菌菌液用接種環取白色念珠菌[CMCC(F)98001]的真菌瓊脂培養基斜面新鮮培養物1白金耳,接種**真菌培養基內,在20-25℃培養24小時后,用滅菌生理鹽水稀釋成
              1:105。
            5.5.5上述制備的菌液,一般當日使用。
            5.6進入無菌室的操作控制要點:
            5.6.1根據試驗程序,將用具物品搬入緩沖間,打開紫外光燈和空氣(Basin air)過濾裝置并使其工作1小時以上。
            5.6.2操作人員用肥皂水刷洗雙手,關閉緩沖間紫外光燈,進入緩沖間內,關閉**層門,用2%來蘇爾或0.1%新潔爾滅溶液洗雙手,用消毒毛巾擦干,換上無菌衣、帽、口罩及消毒鞋。
            5.6.3關閉無菌室內紫外光燈,進入第二層門并將用具搬**無菌室內,關閉無菌室門。
            5.6.4凡進入無菌室后不應再外出取物品,因此,在每次試驗中所用物品必須計劃好,并準備好備用物品。從進入**層門直**無菌室內,隨操作人員的進入應噴霧2%來蘇爾或0.1 %新潔爾滅溶液。
            5.7檢查法:
            5.7.1無菌檢查法包括:直接接種法和薄膜過濾法。前者適用于非抗菌作用的供試品;后者適用于有抗菌作用的或大容量的供試品。
            5.7.2操作時,應先用0.1%新潔爾滅浸泡或擦拭容器表面后,以無菌(意思:沒有活菌)的方法取內容物。
            5.7.3凡無菌檢查中,均應取相應溶劑和稀釋劑同法操作控制,作陰性對照。
            5.7.4供試品制備:
               用滅菌鑷取出注射器,在火焰旁將針芯插入針管并安上針頭,蓋為橡皮塞時,用注射器在已消毒好的橡皮塞中心位置刺入吸取藥液。按規定(guī dìng)須稀釋或滅活的供試品,可直接或將瓶內供試液抽出**滅菌玻璃容器內進行滅活處理并稀釋**規定的體積(volume)和濃度;抽取瓶中內容液體時,應將供試品倒置并使針頭在液面下。
            5.7.5直接接種法:
            按規定量取供試品,以無菌(意思:沒有活菌)操作將該供試品分別接種于需氣菌、厭氣菌培養基6管,其中1管接種金黃色葡萄球菌液1ml,作陽性對照,另接種于真菌培養基5管。輕輕搖動,使供試品與培養基混合。需氣菌、厭氣菌培養基管置30-35℃、真菌培養基管置20-25℃培養7日。在培養期間應逐日觀察并記錄是否有菌生長。陽性對照管在24小時內應有菌生長,如在加入(jiā rù)供試品后,培養基出現渾濁,培養7天后,不能從外觀上判斷有無微生物生長,可取該培養液適量轉種**同種新鮮培養基中或斜面培養基上繼續培養,細菌培養2日,真菌培養3日,觀察是否再出現渾濁或斜面有無菌生長,或用接種環取培養液涂片,染色,用顯微鏡觀察是否有菌。
            5.7.6薄膜過濾法:
            將微孔濾膜過濾裝置(Apparatus)、抽濾瓶、排氣管與真空泵相連,真空泵可置無菌室外。
            取規定量供試品,按規定的方法處理后,加入(jiā rù)0.9%無菌氯化鈉溶液100ml中,混合后,通過裝有孔徑不大于0.45μm的薄膜過濾器,減壓抽干后,用0.9%無菌氯化鈉溶液沖洗濾膜3次,每次**少100ml,取出濾膜分成3等份,分別加入上述二種培養基中,按規定溫度和時間培養。陽性對照管應根據供試品特性加入相應對照菌液1ml(抗細菌藥物(drug),以金黃色葡萄球菌為對照菌;抗厭氧菌藥物,以生孢梭菌為對照菌;抗真菌藥物,以白色念珠菌為對照菌)。陽性對照管細菌應在培養24-48小時,真菌應在培養24-72小時有菌生長(Grow)。
            5.8結果判斷:
            當陽性對照管顯渾濁并確有菌生長,陰性對照管呈陰性時,可根據觀察所得的結果判定:如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管均為澄清或雖渾濁但經證明(zhèng míng)并非有菌生長,均應判為供試品合格;如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管中任何1管顯渾濁并確證有菌生長,應重新取2倍量供試品,分別依法復試,除陽性對照管外,其他各管均不得有菌生長,否則應判為供試品不合格。

            6培訓
            6.1培訓(作用:知識傳遞、技能傳遞、標準傳遞)對象:化驗員。
            6.2培訓時間:二小時。

            7記錄
                 記錄(jì lù)名稱               保存部門               保存時間
               無菌檢驗記錄              質監科            藥品有效期后一年

            QF-01-007-00
            無菌(意思:沒有活菌)檢驗記錄
            品   名:                      批   號:                                                   
            規   格:                      檢驗日期:        年     月     日
            培養基名稱
            需氣、厭氣菌培養基
            真菌培養基


            培養溫度
            30―35℃
            20―25℃
            培養時間


            管   號
            1
            2
            3
            4
            5

            1
            2
            3
            4
            5

            培養天數及結果(result)
            1












            2












            3












            4












            5












            6












            7












            結  論

            備  注

             復核人:                               檢驗人:
            中文字幕亚洲欧美在线不卡